熒光定量PCR儀的基本原理與應(yīng)用

更新時(shí)間：2024-10-16

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　　熒光定量PCR儀是一種利用熒光信號(hào)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）進(jìn)程，并通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的儀器。該技術(shù)以其高靈敏度、高特異性及廣泛的應(yīng)用領(lǐng)域，成為了分子生物學(xué)研究中不可缺工具。

　　熒光定量PCR儀基本原理:

　　熒光標(biāo)記方法：在PCR體系中加入熒光基團(tuán)，如SYBR Green I染料或特定的熒光探針（如TaqMan探針），通過(guò)熒光信號(hào)的變化來(lái)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)PCR擴(kuò)增過(guò)程。

　　Ct值計(jì)算：每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號(hào)達(dá)到設(shè)定閾值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)稱(chēng)為Ct值。Ct值與起始模板拷貝數(shù)的對(duì)數(shù)呈線(xiàn)性關(guān)系，因此可以用來(lái)定量分析。

　　定量原理：通過(guò)已知起始拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)品制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，未知樣品的起始拷貝數(shù)可以通過(guò)其Ct值從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)中計(jì)算得出。

　　熒光定量PCR儀應(yīng)用領(lǐng)域:

　　基因表達(dá)研究：比較不同處理樣本或不同時(shí)間點(diǎn)特定基因的表達(dá)差異，廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究。

　　病原體檢測(cè)：用于檢測(cè)和定量分析病原微生物或病毒含量，如新冠病毒檢測(cè)等。

　　遺傳疾病診斷：通過(guò)檢測(cè)特定的基因突變或染色體異常，輔助遺傳性疾病的診斷和產(chǎn)前診斷。

　　藥物開(kāi)發(fā)：在新藥研發(fā)過(guò)程中，用于驗(yàn)證藥物靶點(diǎn)的有效性及藥物作用機(jī)制的研究。

　　環(huán)境監(jiān)測(cè)：檢測(cè)環(huán)境樣本中的微生物污染程度或特定污染物的基因標(biāo)志物。